ShRNA靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 张艳君 徐酉华 李建厂 贾秀红
• 来源期刊: 中国当代儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HOXA10基因 白血病 慢病毒 RNA干扰 U937细胞
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 论著·实验研究
• 页码范围: 785-791
• 分类号: R-33
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨慢病毒载体介导短发夹RNA(shRNA,siRNA前体)靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖、凋亡和形态的影响.方法 设计并构建4条针对HOXA10基因的shRNA质粒表达载体,并构建HOXA10基因的过表达质粒,将4条干扰质粒分别和过表达质粒共转染293T细胞,用Western blot检测出敲减效果最好的1条质粒并包装成慢病毒(lenti-shHOXA10)；将U937细胞分为干扰组(lenti-shHOXA10)、阴性对照组(lenti-NC)和未处理组,通过流式细胞仪测定慢病毒对U937细胞的感染效率并用real-time PCR、Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用；瑞氏染色观察3组细胞形态上的变化；MTT法检测细胞增殖抑制率；流式细胞术检测3组细胞凋亡率.结果 成功构建了有效沉默HOXA10基因的慢病毒-shRNA载体.干扰组HOXA10 mRNA的沉默效率为(92.3±1.3)％,蛋白表达水平下降91.1％,干扰组细胞抑制率为(43.9±0.7)％,与阴性对照组、未处理组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；瑞氏染色显示干扰组细胞核质比减小、核分裂相少见；干扰组细胞凋亡率为(27.1±1.4)％,显著高于阴性对照组的(19.4±1.9)％和未处理组的(5.5±1.3)％(P＜0.05).结论 慢病毒载体介导的shRNA可稳定地降低HOXA10基因的表达水平,有效抑制U937细胞增殖和促进其凋亡,HOXA10基因有望成为白血病基因治疗的新靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾秀红	滨州医学院附属医院儿科	115	345	8.0	13.0
2	李建厂	滨州医学院附属医院儿科	67	200	6.0	10.0
3	徐酉华	重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室	147	692	14.0	19.0
4	张艳君	滨州医学院附属医院儿科	10	23	3.0	4.0