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摘要:
目的 探讨慢病毒载体介导短发夹RNA(shRNA,siRNA前体)靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖、凋亡和形态的影响.方法 设计并构建4条针对HOXA10基因的shRNA质粒表达载体,并构建HOXA10基因的过表达质粒,将4条干扰质粒分别和过表达质粒共转染293T细胞,用Western blot检测出敲减效果最好的1条质粒并包装成慢病毒(lenti-shHOXA10);将U937细胞分为干扰组(lenti-shHOXA10)、阴性对照组(lenti-NC)和未处理组,通过流式细胞仪测定慢病毒对U937细胞的感染效率并用real-time PCR、Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用;瑞氏染色观察3组细胞形态上的变化;MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测3组细胞凋亡率.结果 成功构建了有效沉默HOXA10基因的慢病毒-shRNA载体.干扰组HOXA10 mRNA的沉默效率为(92.3±1.3)%,蛋白表达水平下降91.1%,干扰组细胞抑制率为(43.9±0.7)%,与阴性对照组、未处理组相比差异有统计学意义(P<0.05);瑞氏染色显示干扰组细胞核质比减小、核分裂相少见;干扰组细胞凋亡率为(27.1±1.4)%,显著高于阴性对照组的(19.4±1.9)%和未处理组的(5.5±1.3)%(P<0.05).结论 慢病毒载体介导的shRNA可稳定地降低HOXA10基因的表达水平,有效抑制U937细胞增殖和促进其凋亡,HOXA10基因有望成为白血病基因治疗的新靶点.
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文献信息
篇名 ShRNA靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖和凋亡的影响
来源期刊 中国当代儿科杂志 学科 医学
关键词 HOXA10基因 白血病 慢病毒 RNA干扰 U937细胞
年,卷(期) 2012,(10) 所属期刊栏目 论著·实验研究
研究方向 页码范围 785-791
页数 分类号 R-33
字数 语种 中文
DOI
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作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 贾秀红 滨州医学院附属医院儿科 115 345 8.0 13.0
2 李建厂 滨州医学院附属医院儿科 67 200 6.0 10.0
3 徐酉华 重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室 147 692 14.0 19.0
4 张艳君 滨州医学院附属医院儿科 10 23 3.0 4.0
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HOXA10基因
白血病
慢病毒
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中国当代儿科杂志
月刊
1008-8830
43-1301/R
大16开
湖南省长沙市湘雅路87号 中南大学湘雅医院内
42-188
1999
chi
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