荧光互补与光能量共振转移检测B类G蛋白偶联受体PAC1二聚化

• 作者: 余榕捷 刘晓飞 曾智星 李梅 郭晓令 钟佳萍
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: GPCRs PAC1 同源二聚化
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 探索·发现
• 页码范围: 1023-1029
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

G蛋白偶联受体(G-protein couple receptors,GPCRs)是最大的超家族膜受体,其中它的B家族成员垂体腺苷酸环化酶激活肽1(PAC1)是垂体腺苷酸环化酶激动多肽(PACAP)的特异受体,介导PACAP神经保护等功能,是神经系统疾病药物开发的重要靶点之一.二聚化或寡聚化是GPCRs普遍存在的现象,但是目前尚没有关于PAC1形成同源二聚体或寡聚体的报道.为了验证PAC1也能进行同源二聚化,该文采用生物发光能量转移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)方法进行检测,结果显示不同浓度梯度共转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)的PAC1-Rluc与PAC1-EYFP重组载体,在底物腔肠素h(coelenterazine h)作用下呈现明显的BRET信号.双分子荧光互补(BiFC)检测显示,带有EYFP N端基因标记的PAC1与带有EYFP C端基因标记的PAC1共转染CHO细胞,能呈现完整的EYFP荧光信号.同时,Western blot检测也显示,高表达PAC1的细胞中可检测到PAC1二聚体的大分子.因此,PAC1是能够进行正常同源二聚化的,这个发现将为后续神经损伤药物的开发奠定全新的理论基础,同时也为其他GPCRs同源二聚化的研究起到启发和借鉴作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李梅		29	119	6.0	10.0
2	余榕捷		37	174	6.0	12.0
3	曾智星		2	5	1.0	2.0
4	郭晓令		6	13	2.0	3.0
5	刘晓飞		8	3	1.0	1.0
6	钟佳萍		2	0	0.0	0.0