利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除重组人干扰素-α2b N端的起始甲硫氨酸

• 作者: 刘磊 宋礼华 王中安 范清林 邹文艺
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甲硫氨酸氨基肽酶 干扰素-α2b N端甲硫氨酸 基因表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 229-233
• 分类号: Q784|Q815
• 字数: 4240字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2012.03.001

摘要

目的 构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(reMAP)的原核表达体系,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸.方法 将PCR扩增得到的大肠杆菌MAP基因克隆到表达载体质粒pACYCDuet-1中,并在宿主菌E.coli BL21中通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:① 将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;② 构建reMAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较.结果 reMAP和rhIFN-α2b均得到正确表达,酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率＞94%、体外作用切除率＞96%.结论 reMAP可以用于 rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘磊	安徽大学生命科学学院	24	41	3.0	5.0
2	王中安	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	2	3	1.0	1.0