突变人干扰素-α2b基因5'端提高其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 宋礼华 张玲 王参军 范清林 邹文艺
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 突变 干扰素-α2b 基因表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 149-153
• 分类号: R392.2|R343.9|R37-33
• 字数: 4164字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2010.02.005

摘要

目的 对人干扰素-α2b(hIFN-ao2b)基因的5'端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平.方法 依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5'端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b',克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Westernblot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性.结果 SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Westem blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108 IU/mg,与未突变工程菌一致.结论 突变hIFN-α2b基因5'端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玲	安徽大学生命科学学院	17	71	3.0	8.0
2	王参军	安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室	2	4	2.0	2.0