通用型动物转基因载体的构建及验证

• 作者: 丰秀静 孟春花 曹少先 田石 茆达干 蒋进
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 转基因通用载体 共表达序列 新霉素磷酸转移酶基因 增强型绿色荧光蛋白质基因 LoxP
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1083-1087
• 分类号: Q782
• 字数: 3907字
• 语种: 中文

摘要

为了构建通用型动物转基因载体,以pBluescriptⅡKS+为基础,根据标记基因所含酶切位点,设计改造多克隆位点,插入从pTARGET载体中扩增的SV40启动子及新霉素磷酸转移酶基因(Neo),其下游插入共表达序列、增强型绿色荧光蛋白质基因(EGFP)及SV40 poly A,并在SV40启动子上游和SV40 poly A下游各添加一个同向的LoxP位点,构建成通用载体pNIGFP,标记基因上游拥有XhoⅠ、SalⅠ、SacⅡ多克隆位点,下游拥有Nhe Ⅰ、ClaⅠ、SacⅠ位点.酶切鉴定和测序表明pNIGFP构建正确.pNIGFP脂质体法转染山羊胎儿成纤维细胞,荧光显微镜下观察到EGFP高表达.遗传霉素(G418)筛选表明,Neo基因表达正常,山羊胎儿成纤维细胞的最适筛选浓度为600μg/ml.pNIGFP可利用G418进行抗性筛选,还可通过EGFP表达对外源基因的整合进行实时跟踪,另外,该载体具有LoxP位点,外源基因整合后可用Cre重组酶去除标记基因,具有高效、方便、安全的特点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	茆达干	南京农业大学动物科技学院	85	1008	18.0	26.0
2	丰秀静	江苏省农业科学院畜牧研究所	5	19	3.0	4.0
6	曹少先	江苏省农业科学院畜牧研究所	32	208	9.0	12.0
7	孟春花	江苏省农业科学院畜牧研究所	17	63	6.0	6.0
8	蒋进	南京农业大学动物科技学院	4	44	2.0	4.0
9	田石	南京农业大学动物科技学院	1	2	1.0	1.0