工程菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2的遗传稳定性

• 作者: 卢圣栋 张琳 李涛 杜志荣 杨晶 王憬惺 王欣 蒋虹 赵庆 路金芝 陈伟京
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因工程菌 靶向融合蛋白 传代 遗传稳定性
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 43-48
• 分类号: R33
• 字数: 2958字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2012.04.011

摘要

目的 本基因工程大肠杆菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2所表达的靶向融合蛋白XE-TNFαm2已被初步证明具有用于清除艾滋病患者体内HIV病毒的前景.其目的蛋白表达水平为32％ ～ 36％细胞总蛋白.本研究旨在验证其遗传稳定性.方法 工程菌株DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm分别在LBAmp+与LBAmp-二种固体培养基上逐日单菌落划线传代,32℃培养过夜.每间隔十代运用一般温控表达技术,确定其XE-TNFαm2的蛋白含量,最后比较分析各代之间目的蛋白(20.3 kDa)表达水平的差异情况.结果 该重组基因工程菌连续传100代后XE-TNFαm2的蛋白表达水平没有明显差异(P＞0.05)；只是在上述两种情况下传至100代后将其置于4℃保藏4、5、6个月,其目的蛋白表达水平有8％的下降.本载体质粒含有的Clts857序列、PL启动子与T1T2末端终止序列,是确保目的基因稳定高表达的3个关键元件.结论 本研究结果证明该工程菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2具有良好的遗传稳定性.