抗苏云金芽孢杆菌Cry1B毒蛋白质单链抗体的筛选与鉴定

• 作者: 刘媛 刘贤进 张存政 张霄 徐重新 王耘
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: 噬菌体抗体库 Cry1B毒蛋白质 单链抗体 ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏·质量安全
• 页码范围: 886-890
• 分类号: X836
• 字数: 4047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.04.037

摘要

利用人源化噬菌体抗体库筛选抗Bt Cry1B毒蛋白质的单链抗体(Single-chain antibodies,scFFv).将扩增后的噬菌体抗体库与固相化包被的Cry1B毒蛋白质特异性结合,经4轮“吸附-洗脱-扩增”后,富集特异性识别Cry1B毒蛋白质的噬菌体单链抗体.从最后一轮筛选中随机挑取单菌落进行单克隆ELISA鉴定,对阳性克隆进行PCR扩增、DNA电泳鉴定及测序,成功筛选获得8个阳性噬菌体scFvs,经鉴定均有完整外源基因片段插入.挑取阳性值最高的scFv(1E2)建立了基于单链抗体的Cry1B毒蛋白质间接竞争ELISA检测方法.结果表明,Cry1B毒蛋白质对噬菌体scFv(1E2)的抑制中浓度(IC50)为1.075 μg/ml,最低检测限(IC10)为0.013 4 μg,/ml,线性检测范围在0.5 ug/ml至4.0,μg/ml之间.