猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达

• 作者: 刘巧荣 包新奇 孙明 康立平 杨璐 申屠芬琴 陈西钊 黄绍华
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PRV gB 分段表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 12-16
• 分类号: R332
• 字数: 3129字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2012.03.003

摘要

目的 分段表达伪狂犬病毒( pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究.方法 分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序.再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化.Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测.以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品.结果 构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中.Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别.以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9％、81.8％和81.8％.结论 本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高；其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙明		12	42	4.0	6.0
2	刘巧荣		6	36	4.0	6.0
3	包新奇		1	7	1.0	1.0
4	杨璐		2	10	2.0	2.0
5	申屠芬琴		5	29	3.0	5.0
6	康立平		1	7	1.0	1.0