SHIP基因突变对白血病细胞系K562细胞迁移及侵袭的影响

• 作者: 刘小军 姚丽 杨敬慈 杨琳 温树鹏 罗建民
• 来源期刊: 中华血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白血病 基因,SHIP K562细胞 突变 慢病毒感染 侵袭
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 38-42
• 分类号: R733.7
• 字数: 4899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2012.01.009

摘要

目的 研究含SH2结构域的肌醇磷酸酶(SHIP)基因碳末端PxxP结构域点突变对细胞体外迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法 采用基因转染技术将携带野生型(wt)和突变型(mu)SHIP基因的慢病毒载体感染人白血病细胞系K562细胞；采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测转染后各组SHIP基因表达水平；采用Transwell小室比较K562/wtSHIP、K562/muSHIP转染后K562细胞跨膜及侵袭能力有无差别；Westem blot法比较各组细胞基质金属蛋白酶( MMP)-2、MMP-9和磷酸化灶性黏着斑激酶(p-FAK)的表达情况,并检测各组细胞NF-KB活性改变.结果 感染慢病毒48 h后FQ-PCR和Westemblot法检测结果显示SHIP基因在K562细胞中表达明显升高；K562/wtSHIP组细胞迁移指数为(15.8±1.4)％,明显低于K562/muSHIP组[(54.3±2.4)％]和转染空载体的细胞对照组[K562/猫免疫缺陷病(pFIV)组,(50.3±3.8)％](P＜0.01)；K562/muSHIP组与K562/pFIV组差异无统计学意义(P＞0.05)；侵袭实验显示K562/wtSHIP组迁移到碳酸脂膜的细胞[(32±6)/视野]较K562/pFIV细胞[(78±13)/视野]和K562/muSHIP细胞[(83±16)/视野]明显减低.而K562/pFIV细胞与K562/muSHIP细胞比较,在侵袭能力上差异无统计学意义(P＞0.05).K562/muSHIP细胞p-FAK和NF-KB表达明显高于K562/wtSHIP细胞.结论 SHIP基因碳末端PxxP结构域对于SHIP基因负调节功能有重要作用.此位点发生突变通过影响FAK蛋白磷酸化、NF-KB活化以及MMP-9的表达影响K562细胞的体外迁移和侵袭能力；SH IP基因碳末端PxxP结构域点突变可能为致病性突变,可能是白血病细胞中SHIP功能异常的原因之一.