藤黄微球菌Rpf活性蛋白的制取及其对红球菌VBNC菌体的复苏作用

• 作者: 丁林贤 张萍华 林红军 横田明 洪华嫦
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 藤黄微球菌 Rpf 克隆与表达 VBNC 红球菌
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 77-82
• 分类号: Q936
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆藤黄微球菌Micrococcus luteus IAM 14879(=NCIMB 13267)的复苏促进因子Rpf(resuscitation promoting factor)的基因,在大肠杆菌中表达获取基因重组蛋白,考察对近缘高GC革兰氏阳性菌红球菌Rhodococcus sp.DS471活的非可培养VBNC (viable but non-culturable)菌体的复苏促进生长能力.[方法]抽提制备藤黄微球菌的DNA,确定rpf基因引物进行PCR扩增,利用pET15b质粒载体并转化大肠杆菌DE3表达,以SDS-PAGE检验获取纯化重组蛋白；在培养基中添加Rpf,以MPN (most probable number)法计数、评价对VBNC状态菌体的复苏促进生长效果.[结果]基因测序证实获得藤黄微球菌的rpf基因并在大肠杆菌中表达；SDS-PAGE分析表明获得rpf基因的重组蛋白；该蛋白对处于VBNC状态的红球菌具有近100倍的复苏促进生长能力.[结论]成功克隆了藤黄微球菌的rpf基因,在大肠杆菌中获得了表达,表明了Rpf蛋白对处于VBNC状态的红球菌具有复苏促进生长效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁林贤	浙江师范大学地理与环境科学学院	23	204	8.0	13.0
2	张萍华	浙江师范大学化学与生命科学学院	38	477	15.0	20.0
3	洪华嫦	浙江师范大学地理与环境科学学院	24	162	6.0	12.0
4	林红军	浙江师范大学地理与环境科学学院	14	55	4.0	7.0