基于RT-qPCR选择性检测水中活性病原菌

• 作者: 何苗 吴舒旭 李丹 杨天 林怡雯
• 来源期刊: 环境科学
• 学科: 地球科学
• 关键词: 逆转录定量PCR RNA 大肠杆菌 粪肠球菌 活性菌
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 第七届环境模拟与污染控制学术研讨会论文
• 页码范围: 4040-4045
• 分类号: X52
• 语种: 中文

摘要

以大肠杆菌和粪肠球菌作为研究对象,研究建立了一种逆转录定量PCR（reverse transcription q quantitative PCR,RT-qPCR）方法,以选择性检测水中活性病原菌.研究结果表明,细菌体内的RNA经过RT-PCR逆转录成cDNA后利用qPCR可定量目的基因拷贝数,对处于稳定生长期的大肠杆菌（培养6～18 h）和粪肠球菌（培养10～38 h）体内的RNA含量进行检测分别为1 copies.CFU^-1和7.98×10^2copies.CFU^-1,以此作为细菌定量的依据,达到准确定量检测水体中目的基因RNA拷贝数而确定活性细菌含量的目的.通过3种方法（培养法、qPCR、RT-qPCR）检测热灭活后的大肠杆菌和粪肠球菌,结果表明与qPCR相比,RT-qPCR能够区分1.43 lg copy（大肠杆菌）与2.5 lg copy（粪肠球菌）的非活性菌,进而选择性检测活性病原菌.实际水样底物基质对RT-qPCR方法的影响不大,RT-qPCR与培养法之间有较好的线性相关性（大肠杆菌,R2=0.930,粪肠球菌,R2=0.948）,本研究建立的方法可以用于实际水样活性病原菌的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何苗	清华大学环境学院环境模拟与污染控制国家重点联合实验室	82	1855	24.0	40.0
2	李丹	清华大学环境学院环境模拟与污染控制国家重点联合实验室	58	932	17.0	30.0
3	林怡雯	清华大学环境学院环境模拟与污染控制国家重点联合实验室	2	26	2.0	2.0
4	吴舒旭	清华大学环境学院环境模拟与污染控制国家重点联合实验室	2	81	2.0	2.0
5	杨天	清华大学环境学院环境模拟与污染控制国家重点联合实验室	2	26	2.0	2.0