摘要:
目的 建立高效液相色谱测定大鼠脑脊液中谷氨酸含量的方法.方法 微透析实验收集到的脑脊液样品用邻苯二甲醛、β巯基乙醇衍生化反应后,高效液相色谱法分离.用RP18色谱柱,流动相A为50 mmol·L-1乙酸钠(乙酸调pH为6.7),流动相B为甲醇/四氢呋喃(97.5/2.5,v/v),用二元梯度洗脱,梯度程序为(T,B%)(0,30)(7,45)(14,30) (20,30),流速1.0 mL·min-1,荧光检测器定量,激发波长340 nm,发射波长450 nm.用高钾脑脊液灌流,考察大鼠纹状体内谷氨酸的变化.结果 谷氨酸的线性范围为3.12×10-2~1.00 mg· L-1(γ=0.9998),日内、日间精密度均<15%,低、中、高浓度回收率分别为(96.6±6.1)%,(99.1±7.7)%,(96.2±4.1)%.高钾人工脑脊液灌流后,谷氨酸明显升高后降低,随后又有升高的趋势.结论 本方法准确,稳定,灵敏,适用于微透析样品中谷氨酸的定量分析.