感染人单核细胞THP-1前后钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达差异性

• 作者: 严杰 孙萍萍 李立伟 林旭瑷
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体 外膜蛋白 双向电泳
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 224-231
• 分类号: R37
• 字数: 5676字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.03.008

摘要

目的 了解感染人单核细胞THP-1前后钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白表达变化,为选择钩体基因工程疫苗候选抗原提供依据.方法 采用Triton X-114法提取感染THP-1细胞前后问号钩体黄疸出血群赖型赖株外膜蛋白.采用双向电泳技术分离钩体外膜蛋白,银染色法检测感染前后钩体外膜蛋白表达量及其差异.感染细胞后4个表达显著上调和4个表达显著下调的钩体蛋白点胰酶水解后,采用LC-MS/MS方法进行鉴定.应用生物信息学软件分析靶蛋白跨膜区和信号肽,采用实时荧光定量RT-PCR检测感染细胞前后靶基因mRNA水平变化.构建靶基因原核表达系统,采用钩体感染豚鼠模型了解重组靶蛋白的免疫保护作用.结果 感染THP-1细胞60 min后,问号钩体赖株外膜蛋白中Loa22、GroEL、F0F1 ATP合成酶α和β亚单位表达水平均显著升高(P＜0.05),FluB2、LigB、OmpA和OmpA家族蛋白表达显著下降(P＜0.05),实时荧光定量RT-PCR检测结果与之基本一致.生物信息学分析结果显示,上述8个外膜蛋白中,OmpA和OmpA家族蛋白为跨膜蛋白,其余均无跨膜结构,Loa22、LigB和OmpA家族蛋白含有信号肽.200 μg重组表达的靶蛋白 rLoa22或rGroEL对豚鼠的免疫保护率均为75.0％.结论 问号钩体赖株感染细胞时外膜蛋白表达谱可发生明显变化.感染后高表达的钩体外膜蛋白尤其是GroEL和Loa22,可作为钩体基因工程疫苗侯选抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	李立伟	浙江大学医学院病原生物学系	34	277	7.0	15.0
3	林旭瑷	浙江大学医学院病原生物学系	28	47	4.0	5.0
4	孙萍萍	浙江大学医学院病原生物学系	2	10	2.0	2.0