表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定

• 作者: 崔红玉 李巧玲 李越 王云峰 王玫 石星明 胡顺磊 赵妍 赵晓岩 闫帅 高明
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马立克氏病毒 转移载体 重组病毒 F基因
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 423-427
• 分类号: S852.65
• 字数: 2641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2012.06.01

摘要

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒.将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF.将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF).其体外增殖与亲本病毒没有差异.经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白.该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础.