耐高温耐酸稳定假密环茵(Armillariella tabescens)MAN47β-甘露聚糖酶体外分子定向进化

• 作者: 刘大岭 吕晓慧 吴秀秀 姚冬生 胡亚冬 谢春芳
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 定向进化 β-甘露聚糖酶 DNA shuffling 耐酸高温稳定 结构分析
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 83-90
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

从已经建立的易错PCR初级突变文库中筛选得到的16个兼具耐酸、高温稳定、高酶活力的克隆出发,将其作为DNA shuffling的亲本基因,利用DNA shuffling技术,结合易化筛选和96微孔板通量筛选的方法获得耐酸、高温稳定的克隆.并且,对筛选出来的耐酸高温稳定的突变子进行测序分析和同源建模,比较分析β-甘露聚糖酶突变基因序列的生物学信息.经过两轮DNAshuffling,最终筛选得到一个耐酸高温稳定突变体1108,其在90℃时酶活力还能维持在70％；在pH 3.0时酶活力维持在70％；在高温80℃和pH 4.0的条件下,酶活力是野生型的10倍；常规条件下(pH 6.0,40℃),酶活力是野生型酶的5倍.序列比对发现耐酸、高温稳定突变体1108有三个碱基发生了改变( T289A、A535T、T1085 C),导致相应的氨基酸发生了改变( Ser97 Thr、Val362Ala、Ile179 Leu).根据同源建模结果和氨基酸性质研究发现,突变位点位于催化中心附近,推测第97位的突变与酶的耐酸性和活性有关,第179位和第362位的突变与酶的高温稳定性有关.实验结果为进一步了解β-甘露聚糖酶MAN47的结构与功能之间的关系提供有用参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚冬生	暨南大学微生物技术研究所	43	293	9.0	14.0
2	刘大岭	暨南大学微生物技术研究所	33	277	10.0	14.0
3	谢春芳	暨南大学微生物技术研究所	24	202	9.0	13.0
4	胡亚冬	暨南大学微生物技术研究所	7	47	4.0	6.0
5	吴秀秀	暨南大学微生物技术研究所	2	3	1.0	1.0
6	吕晓慧	暨南大学微生物技术研究所	2	11	2.0	2.0