日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选与鉴定

• 作者: 任秀梅 何叶 夏志平 李晔 李琳 王本旭 靳朝 马丽敏
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 噬菌体表面展示技术 JEV E蛋白 表位肽
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 866-870
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

筛选日本乙型脑炎病毒（JEV）的E抗原表位，为开展用JEV模拟表位探索JEV的防治研究创造了条件，为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要的线索和依据。以抗JEvE蛋白的单克隆抗体作为固相筛选分子，应用噬菌体表面展示技术，按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体7肽库，挑取噬菌体单克隆培养并ELISA鉴定，对阳性克隆测序分析，确定JEVE抗原模拟表位的氨基酸序列。设计合成包含该表位的E抗原15肽（GGADSMSMAGMAVSY）cDNA序列，与pGEX-KG构建重组表达载体，诱导表达重组多肽并west-ernblot验证。经过4轮筛选后，噬菌体得到高度富集，挑取单克隆ELISA鉴定，有22个克隆呈阳性。对重组多肽进行Western blot验证，结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多抗。应用上述方法成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位，为下一步研究奠定了基础。