CREG低表达饲养层STO细胞的建立

• 作者: 孙鸣宇 张剑 田孝祥 闫承慧 陶杰 韩雅玲
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: CREG RNA干扰 饲养层细胞 胚胎干细胞 自我更新
• 年，卷（期）: 2012,（31）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6034-6037,6010
• 分类号: Q291
• 语种: 中文

摘要

目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)对胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)自我更新的影响及作用机制,本研究拟通过RNA干扰方法建立CREG低表达的饲养层STO细胞,为深入研究奠定基础.方法:用Western Blot方法检测饲养层细胞系STO及ESC细胞系R1中CREG基因的表达.利用Lipofectamine 2000向STO细胞中分别转染RNA干扰空对照载体,含有无意义随机序列的对照载体以及含有4种不同CREG干扰序列的载体.用1.0 μg/ml嘌呤霉素筛选1w,荧光显微镜下挑取绿色荧光蛋白表达较高的克隆进行扩增.Western Blot方法鉴定CREG基因干扰效率,获得CREG表达最低的饲养层细胞克隆.将ESC R1接种到该克隆上,不添加白血病抑制因子,连续培养3代,用碱性磷酸酶染色判断其是否分化.结果:R1几乎不表达CREG,而STO细胞高表达CREG.Western Blot结果证实筛选到的STO克隆3A干扰效果最好,达到85％.在不添加白血病抑制因子的情况下,碱性磷酸酶染色表明R1细胞在该株饲养层细胞上连续培养3代后未见明显分化.结论:成功获得CREG低表达饲养层STO细胞,为深入探讨CREG对ESC自我更新的作用及机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩雅玲	沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科	746	3758	26.0	37.0
2	闫承慧	沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科	84	276	9.0	14.0
3	陶杰	沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科	16	50	3.0	6.0
4	孙鸣宇	沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科	38	108	6.0	10.0
5	田孝祥	沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科	47	48	3.0	4.0
6	张剑	沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科	25	95	5.0	9.0