绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1的克隆、表达谱分析及结合特征

• 作者: 吕丽敏 崔金杰 张帅 滑金锋 王春义 王道杰 雒珺瑜
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 绿盲蝽 化学感受蛋白 表达谱 原核表达 纯化 竞争结合
• 年，卷（期）: 2012,（20）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 4187-4196
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.20.008

摘要

[目的]克隆、组织特异性表达以及荧光结合特征分析绿盲蝽(Apolygus lucorum Meyer-D ü r)化学感受蛋白(chemosensory protein,CSP).[方法]设计特异性引物,用RT-PCR技术克隆绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1,使用半定量RT-PCR和Real-time PCR技术对AlucCSP1组织特异性表达进行研究,在BL2( DE3)工程菌株中用pGEX-4T-1载体进行原核表达,并在GSTrap FF柱中纯化和去标签蛋白.使用bis-hNS作为荧光配基,研究AlucCSP1蛋白与58种气味标样和5种棉花次生代谢物质的结合特征.[结果]得到了绿盲蝽化学感受蛋白基因,命名为AlucCSP1(GenBank登录号:JN573217).该序列阅读框全长393 bp,编码1 30个氨基酸残基,N端有一段长1 7个aa的信号肽,具有4个保守的半胱氨酸残基.绿盲蝽AlucCSP1几乎全部在雌虫触角中表达.构建pGEX/AlucCSP1原核表达载体,在BL21( DE3)工程菌株中表达出分子量约为39 kD的融合蛋白,用亲和层析法纯化、经凝血酶作用去除标签蛋白获得纯化的AlucCSP1蛋白,该蛋白与棉酚、单宁、槲皮素、芦丁水合物亲和力较强,结合常数分别为13.4、32.7、19.7、38.5 μmol·L-1.[结论]克隆得到绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1,在雌性触角内特异表达,并进一步得到约13 kD的AlucCSP1纯蛋白.为研究AlucCSP1在绿盲蝽化学感器中的作用奠定了基础.