TRADD慢病毒载体构建及其对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

• 作者: 代剑华 康秀峰 彭贵勇 牟东 薛世祥 袁月
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: TRADD 慢病毒表达载体 食管再狭窄 基因治疗
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 848-851
• 分类号: R394-33|R329.28|R364.31
• 语种: 中文

摘要

目的 构建抗食管支架术后再狭窄携人TRADD基因慢病毒表达载体,并检测其对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法 以购买的人TRADD基因为模板,采用PCR法扩增目的基因片段,PCR产物经回收纯化后与线性化的慢病毒表达载体pLVX-EGFP-3FLAG-Puro重组.重组质粒转化DH5α感受态细胞.菌落PCR鉴定转化子,阳性克隆测序无误后,质粒共转染293FT细胞制备慢病毒.Real-time定量PCR法检测病毒滴度.Western blot检测TRADD-GFPFLAG融合蛋白的表达.MTT法检测TRADD基因慢病毒对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响.结果 菌落PCR扩增产物经凝胶电泳,阳性克隆得到1 200 bp片段,基因测序显示重组质粒中TRADD序列与GenBank中序列一致.包装产生的慢病毒转染293 FT细胞48 h后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,病毒滴度为3.22×108 IU/ml,Western blot检测到融合蛋白TRADD-GFP-FLAG在293FT细胞中获得有效表达,MTT法证实该融合蛋白具有生物活性,能有效抑制瘢痕成纤维细胞增殖.结论 成功构建并包装了pLVX-TRADD-EGFP-3 FLAG-Puro慢病毒表达载体,其可明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭贵勇	第三军医大学西南医院全军消化病研究所	93	625	14.0	18.0
2	代剑华	第三军医大学西南医院全军消化病研究所	17	74	5.0	7.0
3	薛世祥	第三军医大学西南医院全军消化病研究所	5	36	4.0	5.0
4	牟东	第三军医大学西南医院全军消化病研究所	5	27	3.0	5.0
5	袁月	第三军医大学西南医院全军消化病研究所	10	49	5.0	6.0
6	康秀峰	第三军医大学西南医院全军消化病研究所	2	6	1.0	2.0