反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究

• 作者: 唐红 张文露 张磊 潘玥 胡源 谢素兰 赖国旗 魏立雯 黄爱龙
• 来源期刊: 西南师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 反向线性探针杂交 乙型肝炎病毒 拉米夫定
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 应用研究
• 页码范围: 113-119
• 分类号: Q819
• 字数: 4158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5471.2012.03.021

摘要

目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse line probe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3'、5'对称加有poly-C的特异性探针和5'标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1 ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5％以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100％,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09％(103/105)、100％ (43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.