口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条诊断方法的建立

• 作者: 任维维 刘湘涛 才学鹏 智晓莹 梁仲 祁光宇 蒋韬
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 偶联 通用型 金标检测试纸条 12S
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 255-262
• 分类号: S852.659.6|S854.43
• 字数: 7170字
• 语种: 中文

摘要

为了兽医基层工作人员能够快速诊断口蹄疫病原,与其他传染病做鉴别诊断,有必要建立一种快速、简便区分它们的胶体金免疫层析方法.本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金.将纯化的Asia 1/China/05流行毒株12S偶联抗原的兔抗体制备免疫胶体金,喷免疫胶体金于玻璃纤维制成金标垫.将纯化A/AF72流行株12S偶联抗原的兔抗体和适量O/China/99流行毒株12S偶联抗原的兔抗体混合固定于硝酸纤维素膜上作为检测带.将羊抗兔抗体固定在硝酸纤维素膜的不同区域作为质控带,并组装成口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条.利用其对阴性参考样品、各型阳性参考样品、已知背景的田间样品进行检测.灵敏度试验结果显示:建立的试纸条方法敏感性高、可检测到病毒最低含量为0.98×104 LD50；特异性试验显示:在检测与口蹄疫临床症状相似病原——猪水泡病病毒(SVDV)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)抗原时无交叉反应；重复性试验显示:不同批次间、同一批次内检测结果完全一致；符合性试验显示:检测国家口蹄疫参考实验室已确定口蹄疫病毒血清型的样品90份,阳性符合率、阴性符合率分别为96.70％、100％.本试验研发的口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条具有很好的灵敏度、特异性、重复性和符合性,适合国内流行的口蹄疫病原的鉴别诊断.