EB病毒BARF1基因真核表达载体的构建

• 作者: 侯灵彤 刘敏 刘智群 张放 李淑英 熊亚南 王梅梅
• 来源期刊: 河北联合大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: EB病毒 BARF1基因 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著与综述
• 页码范围: 4-6
• 分类号: R735.2
• 字数: 2532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6633.2012.01.003

摘要

①目的 构建携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.②方法 根据GenBan提供的BARF1基因的cDNA序列,设计特异性引物,并在两端添加酶切位点;常规培养B95-8细胞,提取细胞RNA,通过RT-PCR扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coli DH5α,经氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切与测序鉴定,证实BARF1基因已克隆到pUM-T载体.凝胶回收双酶切产物BARF1片段,再将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)-his,转化E.coli DH5α,通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切分析,确认插入方向.③结果 以B95-8细胞提取RNA进行RT-PCR扩增的cDNA为模板扩增BARF1,得到与预期片段大小相符的666bp的片段;对所提质粒进行鉴定后,证实目的 基因BARF1片段已插入pUM-T载体,经双酶切和测序分析,确认BARF1基因已正确连接到pcDNA3.1(+)-his真核表达载体.④结论 成功地构建真核表达载体.pcDNA3.1(+)/BARF1-his.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘敏		9	28	3.0	5.0
2	李淑英	河北联合大学基础医学院	15	27	3.0	4.0
3	王梅梅	河北联合大学基础医学院	32	102	6.0	8.0
4	熊亚南	河北联合大学基础医学院	29	85	5.0	7.0
5	张放		8	54	4.0	7.0
6	侯灵彤		11	38	4.0	5.0
7	刘智群	河北联合大学冀唐学院	15	65	4.0	8.0