感染高粱花叶病毒甘蔗叶片cDNA文库构建及评价

• 作者: 余乃通 刘志昕 张树珍 张雨良 熊国如 王俊刚 王健华
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 高粱花叶病毒 甘蔗 酵母双杂交文库 构建
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 作物病虫害及其防治、环境保护
• 页码范围: 1096-1100
• 分类号: S435.661
• 字数: 4973字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2012.06.024

摘要

为了研究甘蔗花叶病与甘蔗寄主致病的互作分子机制,利用SMART技术成功构建了感染高梁花叶病毒甘蔗叶片的cDNA文库,用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验.采用Omega公司Plant RNA Kit提取感染高粱花叶病毒甘蔗叶片总RNA,经过Oligotex纯化获得mRNA,将其反转录成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR扩增双链cDNA.经SfiI酶切并去除短片段后,连接到pGADT7-SfiI载体上,成功获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒.经检测构建的文库容量为1.6×106 cfu,文库滴度2.2× 106 cfu/mL,文库cDNA插入片段长度主要分布在700～2 000 bp,文库重组率约为96％.结果表明,该文库质量较好,为筛选分离抗病功能基因及开展寄主与病毒互作的研究奠定了基础.