肠道病毒71型灭活疫苗诱导小鼠细胞免疫抗原表位的筛选

• 作者: 方鑫 朱凤才 李凤祥 杨静玉 梁争论 毛群颖 王一平 王军志 程刚 高帆 鲁凤民
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒A型,人 疫苗,灭活 免疫,细胞 抗原表位
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 疫苗研究
• 页码范围: 1-5
• 分类号: R373.2+3|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 筛选肠道病毒71型(Enterovirus 71.EV71)灭活疫苗免疫小鼠后诱导的细胞免疫抗原表位,探讨EV71疫苗诱导的细胞免疫应答机制.方法 以EV71 BJ08株(C4基因型)病毒结构蛋白氨基酸序列为模板,合成覆盖EV71 VP1～VP3的256条合成肽(每条肽12个氨基酸),分别以其为刺激物(80 μg/ml),采用ELISPOT法测定EV71灭活疫苗免疫小鼠脾单个核细胞( Mononuclear cell,MNC)诱导IFNγ分泌的斑点形成细胞数(Spot-forming cell,SFC),筛选细胞免疫抗原表位.从脾MNC中去除CD4+或CD8+T细胞及封闭MHCⅡ类分子或MHC Ⅰ类分子,分析抗原提呈途径.结果 通过对256条合成肽的筛选,获得3条可刺激小鼠脾MNC高水平分泌IFNγ的合成肽.以3条合成肽作为刺激物时,小鼠脾MNC分泌IFNγ SFC均值(单针免疫组:22.3、12.8、17.4；两针免疫组:29.3、44.1、28.5)较乙肝表面抗原对照肽S28-29(单针:2.1；两针:5.2)显著升高(P＜0.01).当MNC中去除CI4+T细胞或封闭MHCⅡ类分子后,IFNγ SFC均值显著下降(P＜0.05)；而去除CD8+T细胞或封闭MHC I类分子时,IFNγ SFC均值未见显著性差异(P＞0.05).结论 已成功筛选出3个EV71细胞免疫抗原表位,分别位于VP1、VP2和VP3区域.3条合成肽均属MHCⅡ类限制性多肽.