卵巢癌相关抗原CA125串联重复序列的原核表达纯化及抗血清制备

• 作者: 李武县 梁勤东 汪仙桃 涂植光 王秦 董晋豫 郭变琴
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CA125 原核表达 抗血清制备
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1154-1157
• 分类号: R392-33|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的:建立CA125串联重复序列(CA125R)原核表达系统,表达纯化重组CA125R蛋白并制备其抗血清.方法:全基因合成一段CA125串联重复序列,并将其克隆至pET-32a(+),构建CA125R蛋白原核表达载体pET-CA125R；将构建好的pET-CA125R载体转化至E coli BL21(DE3),确定最佳可溶性表达条件,通过Ni-NTA亲和层析系统纯化重组CA125R蛋白；纯化重组蛋白经Western blot方法验证后,免疫家兔制备抗血清.结果:成功构建CA125串联重复序列原核表达载体,确定了最佳可溶性诱导表达条件(0.5 mmol/LIPTG,15℃诱导6h)；Western blot结果证实纯化的重组蛋白正确,纯度高；制备的抗血清能特异识别重组CA125R蛋白和天然CA125糖蛋白.结论:成功建立了CA125R高效原核表达系统,并制备了高纯度重组CA125R蛋白及其抗血清.