RI基因真核表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞的影响

• 作者: 姚雪 李红彦 潘湘阳 熊东梅 陈俊霞
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 核糖核酸酶抑制因子 人脐静脉内皮细胞 血管生成素 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1591-1595
• 分类号: R322.12|R329.23|R394-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及迁移能力的影响.方法 用RT-PCR方法扩增RI基因,酶切后将其插入pcDNA3.1,构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,在脂质体介导下转染HUVECs,RT-PCR检测RI、ANG基因的mRNA表达水平；Western blot检测RI、ANG、MMP-2、MMP-9的表达水平；CO-IP法检测ANG和RI的相互作用,MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 真核表达质粒构建成功；转染pcDNA3.1-RI组细胞RI基因的mRNA及蛋白的表达较2个对照组(转染pcDNA3.1空载体组和未转染质粒组)均呈显著性增加(P＜0.05),而ANG基因的mRNA及蛋白的表达均降低(P＜0.05),MMP-2、MMP-9蛋白表达水平亦降低(P＜0.05)；CO-IP法检测到ANG和RI在细胞内能结合；转染pcDNA3.1-RI质粒到HUVECs细胞后细胞的增殖活力明显降低(P＜0.05),G0～G1期比例明显增加,S期减少.结论 成功构建的真核表达质粒能显著增加RI基因及其蛋白水平的表达,RI可以直接在转录水平上降低ANG的表达,在细胞内与ANG结合,从而影响内皮细胞的增殖、迁移能力.