基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达

• 作者: 刘超 张华群 曹洁 潘卫 王锦红 祁培培 章萍萍 葛宜兵 邓松华 陈秋莉
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: CHIKV-E2 跨膜疏水性蛋白 全基因合成 缺失突变体 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 617-622
• 分类号: R373.3|R349.6
• 字数: 4515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2012.06.001

摘要

目的 通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1~404 aa)及其跨膜疏水区(351~378 aa)缺失突变体E2(1~350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响.方法 利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列.结合重叠延伸PCR(OE-PCR) 原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况.结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1~404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒 pET21b-E2(1~404)和pET21b-E2(1~350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1~350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1~404)有明显提高.结论 E2蛋白跨膜疏水区(351~378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高.