多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒

• 作者: 廖秀云 徐海聂 沙才华 王振全 罗宝正 薄清如 陈伟生 陈静静
• 来源期刊: 湖北畜牧兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 非洲猪瘟病毒 多重荧光PCR 检测
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 4-6,9
• 分类号: S855.3
• 字数: 3523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-273X.2012.02.001

摘要

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法。根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列，设计一套特异性的引物和探针，对猪瘟病料提取RNA，经RT—PCR扩增后将产物回收，克隆至pMDl8-T构建pMDl8-T—CSFV阳性质粒；非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成，构建pMDl8-T—ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板时建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验，结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开，灵敏度可以达到10拷贝的数量级．而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后．发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标。未知样品检出猪瘟病毒3份阳性，未检出非洲猪瘟病毒阳性。