猪细小病毒LDR-PCR检测方法的建立和应用

• 作者: 丁先锋 姜永厚 徐辉 汪平 程菊会 董沁芳 郭江峰 郭瑶
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: LDR-PCR 猪细小病毒 条件优化 检测
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 165-169
• 分类号: S858.28
• 字数: 4012字
• 语种: 中文

摘要

为准确特异灵敏地检测猪细小病毒( PPV),建立一种新的LDR-PCR方法.首先在病毒的保守区内设计一对LDR探针,LDR探针两端各连有一段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果.以标准质粒为模板,通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法.结果表明,可以特异地检测PPV,与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒( PCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应;最低检测限为102个拷贝.利用建立的方法对41例临床样本进行检测,14份样品PPV阳性,与普通PCR检测结果符合率为97.6％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭江峰	浙江理工大学生命科学学院	52	222	8.0	13.0
2	丁先锋	浙江理工大学生命科学学院	44	201	9.0	12.0
3	姜永厚	浙江理工大学生命科学学院	21	195	7.0	13.0
4	徐辉		28	105	6.0	9.0
5	董沁芳	浙江理工大学生命科学学院	5	9	1.0	3.0
6	郭瑶	浙江理工大学生命科学学院	3	9	1.0	3.0
7	汪平	浙江理工大学生命科学学院	2	9	1.0	2.0
8	程菊会	浙江理工大学生命科学学院	3	9	1.0	3.0