基于磁珠和时间分辨荧光免疫分析的微囊藻毒素LR单链抗体筛选与鉴定

• 作者: HuovinenTuomas 刘媛 刘贤金 张存政 张霄 王耘 粱颖 谢雅晶 贺江
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 微囊藻毒素LR 单链抗体 时间分辨免疫分析 磁珠
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 贮藏·保鲜·加工
• 页码范围: 330-337
• 分类号: S917.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.02.015

摘要

[目的]从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体.[方法]采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案.用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定.再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体；诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序.[结果]两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88× 10-6.第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍.最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微囊藻毒素LR的检测灵敏度(IC10)为13 ng.mL-1,抑制中浓度(IC50)为435 ng·mL-1,线性范围在31-5 952 ng.mL-1.[结论]本研究筛选到的单链抗体,有潜力应用于微囊藻毒素LR的免疫学检测或免疫亲和柱的制备,同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法.