PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测

• 作者: 任充华 张婷婷 张志强 张智英 杨涵江 王令 辛颖
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 小鼠 SV40 T 转录激活域rtTA PiggyBac转座子 正负向筛选
• 年，卷（期）: 2012,（17）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 3576-3583
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.17.014

摘要

[目的]构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体.[方法]以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP.[结果]经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确；经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍.[结论]得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张婷婷	西北农林科技大学动物科技学院	21	144	6.0	11.0
2	王令	西北农林科技大学动物科技学院	6	10	2.0	3.0
3	杨涵江	西北农林科技大学动物科技学院	3	3	1.0	1.0
4	张志强	西北农林科技大学动物科技学院	20	135	9.0	11.0
5	任充华	西北农林科技大学动物科技学院	4	4	1.0	2.0
6	辛颖	西北农林科技大学动物科技学院	4	3	1.0	1.0