过表达人RI抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭、转移及EMT发生

• 作者: 姚雪 李林 熊冬梅 舒静 陈俊霞
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人核糖核酸酶抑制因子 T24细胞 细胞转移 细胞侵袭 EMT
• 年，卷（期）: 2012,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2378-2383
• 分类号: R394.2|R73-37|R737.14
• 语种: 中文

摘要

目的 检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因的质粒pIRES2-EGFP-RI对人膀胱癌T24细胞侵袭转移及上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)现象的影响.方法 将连有RI的质粒pIRES2-EGFP-RI稳定转染T24细胞后利用G418筛选出阳性克隆.根据转染的质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-0(转染pIRES2-EGFP质粒)和T24-RI组(转染pIRES2-EGFP-RI质粒).RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA 水平变化,细胞免疫荧光及Western blot检测RI蛋白的表达,利用HE染色观察其细胞形态的变化,Transwell方法检测细胞侵袭及转移能力的变化,Western blot检测侵袭转移及EMT相关蛋白Twist、MMP-9和Snail及E-cadherin的表达,构建移植瘤模型,利用HE染色观测肺组织切片癌细胞转移情况,组织免疫化学方法检测移植瘤中RI、Twist、Snail及E-cadherin 的表达.结果 T24-RI组人RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(P＜0.05)；HE染色结果表明细胞铺展良好,核质比明显减小,细胞由间质形态向上皮形态转变；Transwell方法显示T24-RI组细胞的侵袭及转移能力较T24组、T24-0组明显下降；Western blot结果表明T24-RI组Twist、MMP-9和Snail较T24组、T24-0组显著降低(P＜0.01),E-cadherin较T24组、T24-0组显著升高(P ＜0.01)；HE染色肺组织切片显示T24-RI组较其他两组癌细胞转移降低,组织免疫化学结果表明T24-RI组RI、E-cadherin蛋白明显升高,而Twist、Snail显著降低.结论 过表达人RI载体提高了RI蛋白的表达水平,并抑制了人膀胱癌T24细胞EMT的发生,从而抑制了膀胱癌T24细胞的侵袭、转移.