核糖核酸酶抑制因子过表达抑制B16细胞的侵袭和转移

• 作者: 姚雪 李红彦 潘湘阳 熊冬梅 陈俊霞
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 核糖核酸酶抑制因子 B16黑色素瘤细胞 细胞黏附 细胞运动 肿瘤转移 肿瘤侵润
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 284-289
• 分类号: R392-33|R73-37|R739.5
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)真核表达载体,检测其对B16细胞侵袭和转移能力的影响.方法 提取人7703细胞中的总RNA,RT-PCR特异性扩增RI编码区序列,利用基因重组技术将其克隆到载体pIRES2-EGFP中,稳定转染B16细胞以后,经G418筛选出阳性克隆.根据转染质粒不同分别命名为B16细胞组(未转染组)、空质粒对照组(pIRES2 -EGFP组)和实验组(pIRES2-EGFP-RI组).RT-PCR检测B16细胞中RI mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫化学检测RI蛋白水平的表达；HE染色观察细胞形态的改变,黏附实验、划痕实验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化；Western blot检测MMP-2、MMP-9和nm23-H1以及E-cadherin的表达；建立C57BL/6小鼠肺转移模型,观察肺上肿瘤转移灶的变化.结果 酶切和测序结果证明重组质粒构建成功,实验组细胞RI的mRNA和蛋白的表达较B16细胞组和空质粒对照组显著升高(P＜0.05)；HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小；转染pIRES2-EGFP-RI质粒的实验组细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05)；与两对照组相比,实验组细胞MMP-2和MMP-9的表达水平明显降低,nm23-H1和E-cadherin的表达水平明显升高(P＜0.05)；动物实验结果显示与对照组相比,实验组的肺转移灶明显减少.结论 成功构建的RI真核表达质粒能升高RI基因及蛋白水平的表达,显著抑制了B16细胞的转移和侵袭能力.