基于舌鳞癌Tca8113细胞醛脱氢酶活性不同构建差异表达基因cDNA文库

• 作者: 孙守娟 季平 李颖 漆小娟 邓诚 邹波
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人舌鳞癌Tca8113 抑制性消减杂交技术 cDNA文库 肿瘤干细胞 醛脱氢酶
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 226-230
• 分类号: R394-33|R394.2|R739.86
• 语种: 中文

摘要

目的 构建舌鳞癌Tca8113细胞系中高、低醛脱氢酶活性(high/low aldehyde dehydrogenase activity,ALDHhigh/ALDHlow)细胞差异表达基因cDNA文库.方法 用流式细胞仪检测ALDEFLUOR(R)染色的Tca8113细胞中干细胞标志物ALDH的表达,并收集ALDHhigh和ALDHlow细胞；用Trizol分别提取两亚群细胞的总RNA;用抑制性消减杂交(SSH)对2组RNA进行差异基因筛选和扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α.文库扩增后,每库随机挑取24克隆进行酶切、测序及同源性分析.结果 分选得到ALDHhigh和ALDHlow两亚群细胞,其中ALDHhigh细胞的比例为2.5％；分光光度计测得ALDHhigh和ALDHlow的RNA D( 260 )/D( 280)的比值分别为1.93和1.92;构建了ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA双向文库,每个库约500个克隆菌落,每库随机挑选24个菌落进行PCR分析,克隆片段均 匀分布在200～700 bp,无假阳性克隆.测序结果经同源性比对分析和PubMed检索,其中与肿瘤有关的基因有SLC25A13、KLHL2、NPC1、WAPL、BARD1、Notch2、EEF2K.结论 成功构建ALDHhigh和ALDHlow细胞差异基因cDNA文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季平	重庆医科大学附属口腔医院颌面外科	71	168	5.0	8.0
2	李颖	重庆医科大学附属口腔医院颌面外科	45	290	10.0	14.0
3	邓诚	重庆医科大学附属口腔医院颌面外科	11	32	3.0	5.0
4	孙守娟	重庆医科大学附属口腔医院颌面外科	9	13	3.0	3.0
5	邹波	重庆医科大学附属口腔医院颌面外科	10	13	3.0	3.0
6	漆小娟	重庆医科大学附属口腔医院颌面外科	6	7	2.0	2.0