醇类沉淀法提取尿液蛋白的优化策略

• 作者: 周慧 张曼 雷婷
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 醇类 沉淀法 尿蛋白 条件优化
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1534-1536
• 分类号: R446.1
• 字数: 3552字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2012.11.003

摘要

目的 研究提取条件,探讨提取尿液蛋白的优化策略.方法 收集健康志愿者的混合尿液标本,采用甲醇、乙醇、异丙醇沉淀法在不同的条件下提取尿蛋白,这些条件包括:醇类试剂的种类、醇类试剂的比例、醇类试剂与尿液作用的不同温度及作用时间、不同的温度处理程序等.然后测定提取的蛋白浓度,评价蛋白回收量;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)评价总蛋白条带;蛋白免疫印迹评价在不同条件下提取的目的 蛋白条带.结果 孵育条件固定为4℃ 30 min时,溶剂为75%乙醇可提取蛋白最多为(649.03±28.33)μg;SDS-PAGE和免疫印迹结果显示,在不同醇类溶剂条件下提取的总蛋白条带和目的 蛋白条带呈趋势变化.提取试剂条件固定为75%乙醇时,改变孵育的温度方案,显示先4℃孵育30 min后,再-20℃过夜提取的总蛋白最多为(599.93±42.20)μg;SDS-PAGE和免疫印迹结果都显示,孵育温度方案不同,所提取的总蛋白条带和目的 蛋白条带无明显差异.结论 75%乙醇,在4℃孵育30 min后,-20℃过夜条件下,可高效提取尿中胰淀粉酶(AMY),用于尿AMY定性定量检测.醇类溶剂的比例对提取的总蛋白量影响很大,且对不同分子量蛋白有选择性;孵育温度条件主要影响总蛋白量.