人SPRED2基因重组腺病毒载体的制备及其对K562细胞ERK通路的影响

• 作者: 刘小云 张群伟 杨月峰 王华 王立生 罗芳
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: Spred2 重组腺病毒载体 ERK通路 K562细胞
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 221-225
• 分类号: R733.7|Q75|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带SPRED2的质粒载体与重组腺病毒载体,并观察其在K562细胞的表达及对ERK信号通路的作用,为Spred2在造血细胞中的作用的研究奠定基础.方法:以HepG2细胞cDNA为模板,RT-PCR克隆SPRED2全长CDS序列,并亚克隆到pCDNA3.0和pshuttle-CMV质粒载体,构建携带SPRED2的真核表达载体pCDNA3.0-Spred2与穿梭载体pshuttle-CMV-Spred2;将线性化pshuttle-CMV-Spred2与腺病毒骨架质粒Adfl1p在感受态细胞BJ5183中进行同源重组,产生重组质粒Adfl1p-Spred2;后者经线性化后转染至HEK293细胞进行病毒包装；在HEK293细胞扩增病毒颗粒,以CsCl密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测定病毒滴度；将病毒颗粒以100MOI感染K562细胞,Western blot检测Spred2过表达情况及Spred2对细胞ERK的影响.结果:经酶切、DNA测序、Western blot检测等方法鉴定,证明pCDNA3.0-Spred2与Adfl1 p-Spred2携带Spred2序列正确,能够在HEK293细胞、K562细胞正确表达,Spred2过表达能够显著抑制K562细胞ERK活性.结论:成功构建对K562细胞有高感染效率的SPRED2重组腺病毒载体,且Spred2对K562细胞ERK信号通路有显著抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王华	军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室	68	439	13.0	17.0
2	王立生	军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室	76	410	10.0	16.0
3	杨月峰	军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室	11	20	2.0	4.0
4	张群伟	军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学实验室	9	108	6.0	9.0
5	罗芳		13	20	2.0	4.0
6	刘小云		4	11	1.0	3.0