致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌cya、crp双基因缺失株构建及部分生物学特性分析

• 作者: 姜露 张志强 朱国强 朱春红 王锴
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: Red重组系统 cya基因突变 cya、crp双基因突变
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1358-1363
• 分类号: S852.61
• 字数: 5256字
• 语种: 中文

摘要

利用λ噬菌体Red同源重组系统构建致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌国内分离株G8107、G803、G8120和非致病性大肠杆菌J5的cya、crp基因缺失株,检测所得突变株的部分生物学特性,为大肠杆菌减毒活疫苗的研制提供新思路.首先,以pKD3质粒为模板扩增带有与目的基因(cya和crp)两侧序列同源的氯霉素抗性基因PCR片段;其次将PCR扩增产物电转化入含有pKD46质粒的野生型毒株感受态细胞中,获得目的基因被氯霉素抗性基因同源替换的缺失株;利用携带FLP位点特异性重组酶的温度敏感性质粒pCP20去除上述缺失株中的抗性基因标志,进一步结合PCR扩增和DNA测序,证明基因缺失株的正确构建,本试验成功构建上述各株大肠杆菌的△cya基因缺失株和△cyacrp双基因缺失株.生长试验、酵解试验以及毒力检验试验表明,相对于亲本株,上述缺失株生长速度减慢,分解利用糖的能力较差,对1日龄雏鸡的毒力显著降低,本试验结果初步证实所构建的缺失株可作为减毒疫苗候选株使用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱春红	扬州大学兽医学院	9	100	5.0	9.0
3	朱国强	扬州大学兽医学院	183	1462	21.0	30.0
6	王锴	扬州大学兽医学院	7	5	1.0	2.0
8	姜露	扬州大学兽医学院	12	29	2.0	5.0
9	张志强	扬州大学兽医学院	5	13	2.0	3.0