解偶联蛋白嵌合体及突变体的构建方法

• 作者: 付彤 刘洋 段秀梅 沃夫冈·格莱尔 王超 王银萍 田庄
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 解偶联蛋白 线粒体 钙离子通道
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 174-179
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4693字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130139

摘要

目的:构建解偶联蛋白(UCPs)嵌合体和突变体,为阐明解偶联蛋白家族功能结构域的研究提供条件.方法:采用普通PCR和重叠延伸PCR获得UCPs嵌合体基因片段,分别插入pCR2.1测序载体后进行测序,再以限制性内切酶连接方式将嵌合基因定向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,获得pcDNAUCP1UCP2、pcDNAUCP2UCP1和pcDNAUCP3UCP1,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pcDNA.利用定向点突变产生pcDNA-UCP3R167G/pcDNA-UCP3RE171/172GG,并进行测序证实.结果:PCR和酶切,获得的目的基因与嵌合基因片段中包含的碱基数量吻合；测序结果,UCPs嵌合体基因序列、突变体基因序列与预期设计完全相同.结论:成功地构建了含有UCPs嵌合体和突变体基因重组真核表达质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段秀梅	吉林大学第一医院病理诊断中心	63	241	7.0	12.0
2	付彤	吉林大学第一医院乳腺外科	54	199	7.0	11.0
3	王超	吉林大学第一医院病理诊断中心	104	666	13.0	24.0
4	刘洋	吉林大学第一医院眼科	320	1688	19.0	27.0
5	王银萍	吉林大学第一医院病理诊断中心	67	196	8.0	11.0
6	田庄	吉林大学第一医院病理诊断中心	15	49	4.0	6.0