双干扰质粒共转染对胃癌BAG-1基因亚型表达的抑制作用

• 作者: 李静波 杨继元 王丹 胡守亮 陈铭
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 胃癌 BAG-1基因 短发卡RNA 小分子干扰
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 327-331
• 分类号: R735.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2013.04.003

摘要

目的 构建针对人BAG-1(Bcl-2-associated athanogene 1)基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,探讨其对人胃癌SGC-7901细胞BAG-1主要亚型表达的抑制作用及对细胞生长的影响.方法 以人BAG-1 mRNA编码区为RNA干扰靶点,设计2条不同的位于BAG-1基因P29、P33、P46、P50亚型的两个通用外显子上64nt寡核苷酸干扰片段A、B及1条阴性对照片段S,将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至SGC-7901细胞中,设空白对照组(未转染质粒SGC-7901-Un)、阴性对照组(转染阴性对照质粒pGensil-Neg)、干扰组(转染干扰质粒pGensil-BAG1-A和pGensil-BAG1-B),用RT-PCR、Western blot检测BAG-1基因的干扰效果.MTT法检测细胞生长情况并绘制生长曲线.结果 酶切及测序结果证实,pGensil BAG1-A和pGensil-BAG1 B干扰质粒及阴性对照质粒pGensil-S构建成功.质粒在SGC-7901细胞中的转染效率达40％～50％.阴性对照组细胞BAG-1基因表达与空白对照组无明显差异,干扰组细胞BAG-1基因表达较空白对照组显著下降(P＜0.01),表达抑制率在mRNA水平为(63±9.8)％,在蛋白水平对BAG1-P46、BAG1-P32亚型的抑制率分别为(94.3±1.08)％、(66.1±6.5)％.生长曲线表明细胞生长受到了抑制.结论 针对人BAG-1基因的shRNA真核表达质粒pGensil-BAG1-A和pGensil-BAG1-B共转染能高效特异的抑制胃癌SGC-7901细胞中BAG-1主要亚型的表达,并抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡守亮	长江大学附属第一医院肾内科	19	61	5.0	6.0
2	王丹	长江大学附属第一医院中心实验室	28	153	8.0	12.0
3	杨继元	长江大学附属第一医院肿瘤科	38	82	5.0	7.0
4	陈铭	长江大学附属第一医院中心实验室	14	60	4.0	7.0
5	李静波	长江大学附属第一医院中心实验室	4	10	2.0	3.0