BRD7逆转录病毒稳定系的构建及其功能评价

• 作者: 康铁邦 张如华 武远众 胡开顺
• 来源期刊: 分子诊断与治疗杂志
• 关键词: BRD7 病毒载体 稳定株 抑癌基因
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 240-244
• 页数: 5页
• 字数: 4009字
• 语种: 中文

摘要

目的探索BRD7（bromodomain-containing protein 7）是否具有抑癌基因的功能。方法根据NCBI提供的BRD7基因序列设计特异性引物扩增其编码区序列，经酶切、连接转化后进一步挑取单克隆菌落进行菌液PCR筛选及测序鉴定得到阳性重组质粒。共转293T细胞后收集浓缩病毒上清并感染U2OS细胞，24 h后用嘌呤霉素（puromycin）筛选稳定表达BRD7的细胞株。结果菌落PCR扩增及DNA测序分析证明重组pMSCV-BRD7-GFP质粒克隆成功。GFP绿色荧光结果显示，绝大部分细胞成功整合了pMSCV-GFP或pMSCV-BRD7-GFP外源质粒；Western blotting检测发现感染重组质粒pMSCV-BRD7-GFP的细胞株中BRD7蛋白的表达水平显著高于对照组。功能结果显示，过表达BRD7显著抑制U2OS细胞的增殖，促进下游靶基因p21与MDM2的表达。结论本研究成功构建了针对BRD7基因的逆转录病毒稳定系，且初步证明了BRD7发挥抑癌基因的功能，为下一步深入研究其被调控的机制与功能奠定了基础。