IFITM2的克隆表达及其抗病毒作用初探

• 作者: 刘存霞 朱羿龙 李昌 李沂 杜寿文 王茂鹏 秦艳青 金宁一
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: IFITM2 克隆表达 抗病毒作用
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 634-638
• 页数: 5页
• 分类号: Q781
• 字数: 3897字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2013.06.017

摘要

目的:构建含有ifitm2基因的重组质粒,在人胚肾HEK293T细胞中表达,并验证IFITM2蛋白的抗病毒作用.方法:参照Genbank ifitm2基因序列,设计上下游引物,通过RT-PCR技术扩增ifitm2基因,并将扩增产物连接至pMD18-T-simple载体上,目的基因测序正确后进一步亚克隆至真核表达载体pVAX1上,转染HEK293T细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)和激光共聚集显微镜(LCSM)验证外源基因在细胞内的表达情况.同时HEK293T细胞过表达IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染细胞,通过Western blot检测IFITM2蛋白对病毒的抑制作用.结果:成功获得ifitm2基因,测序正确,将其连接到pVAX1载体中,经酶切鉴定,证明含有ifitm2基因的重组质粒构建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能够在HEK293T细胞中表达,且呈广泛分布.过表达IFITM2蛋白后,荧光蛋白分析表明,该蛋白对病毒感染具有一定的抑制作用.结论:成功构建了含有ifitm2基因的重组真核表达质粒,该质粒可以在真核细胞中得到有效表达,且对VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,该研究为进一步探讨IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子机制提供了实验及理论基础.