CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究

• 作者: 周清 徐锦堂 杨艳 王黎 陈剑
• 来源期刊: 眼科新进展
• 关键词: 人羊膜上皮细胞 氯甲基苯甲酰胺 4’,6-二脒基-2-苯基吲哚 标记 示踪
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1001-1005
• 页数: 5页
• 字数: 4925字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)的体外培养方法,并探讨氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对HAEC进行联合标记示踪的可行性.方法 运用酶消化法获取HAEC,收集第2代细胞,流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的表达率,SP免疫化学法鉴定HAEC.CM-Dil与DAPI对HAEC进行体外标记,荧光倒置显微镜下观察1d、7d和14 d的标记情况,台盼蓝染色检测细胞活力,CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响.结果 HAEC贴壁培养后呈扁平多角形,CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99.64％、2.21％、32.41％、0.84％、36.70％,细胞角蛋白Keratin阳性表达.HAEC在CM-Dil和DAPI联合标记1d后,荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光,标记率为100％；14 d后,经传代培养的HAEC荧光强度与1d时相近,细胞形态无改变.台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96.8％ ～ 98.9％,CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CM-Dil和DAPI可有效标记HAEC,染色简单、无细胞毒性,荧光衰减较慢,可作为HAEC的标记及示踪方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周清	暨南大学附属第一医院眼科	71	292	8.0	14.0
2	陈剑	暨南大学附属第一医院眼科	126	747	14.0	21.0
3	徐锦堂	暨南大学医学院眼科研究室	142	1284	19.0	27.0
4	王黎	暨南大学附属第一医院眼科	10	35	4.0	5.0
5	杨艳	暨南大学附属第一医院眼科	6	35	3.0	5.0