肠道病毒71型病毒样颗粒在汉逊酵母中的表达

• 作者: 付作申 宋琳琳 张现臣 林福玉 许珊珊 贾士儒 顾美荣 魏文进
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 肠道病毒71型 汉逊酵母 病毒样颗粒 表达
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 页码范围: 604-609
• 页数: 6页
• 字数: 4953字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2013.08.010

摘要

目的应用汉逊酵母表达系统进行肠道病毒71型（EV71）病毒样颗粒（VLP）的表达。方法将经过汉逊酵母密码子优化的人EV71的 P1和3CD基因片段克隆到汉逊酵母表达载体PMV上，获得重组表达质粒PMV-P1-3CD，转化汉逊酵母宿主菌AU0501，PCR方法及稳定传代培养筛选整合P1和3 CD基因的重组菌株。重组菌种接种在含有1％甲醇的培养基中进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot检测。挑选优胜表达菌株进行30 L发酵罐发酵培养，发酵产物经过粗略纯化后进行电镜分析。结果筛选获得EV71重组表达菌株；SDS-PAGE检测结果显示在相对分子质量（Mr）为26×103、33×103、35×103处有明显的VP3、VP1、VP0蛋白条带，Mr 大小与预期的目的蛋白大小一致；Western blot检测结果显示表达产物与EV71-VP1单克隆抗体在M r 为33×103处有较为明显的VP1反应条带，表达产物具有良好的免疫反应性；表达菌株发酵表达量可达200 mg/L，电镜分析可见24～30 nm的VLP，且颗粒结构完好。结论应用汉逊酵母表达系统成功表达了EV71 VLP，为今后研制EV71 VLP疫苗奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张现臣	北京民海生物科技有限公司研发中心	5	3	1.0	1.0
2	付作申	北京民海生物科技有限公司研发中心	3	17	1.0	3.0
3	魏文进	北京民海生物科技有限公司研发中心	8	20	1.0	4.0
4	林福玉	北京民海生物科技有限公司研发中心	2	2	1.0	1.0
5	顾美荣	天津科技大学生物工程学院	1	1	1.0	1.0
9	宋琳琳	北京民海生物科技有限公司研发中心	2	1	1.0	1.0
10	许珊珊	北京民海生物科技有限公司研发中心	1	1	1.0	1.0
11	贾士儒		1	1	1.0	1.0