猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000的表达、纯化及活性分析

• 作者: 姜永强 李雪琴 江华 王涛 袁媛 郑玉玲 郝淮杰
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪链球菌 SSU05_1000 紧密连接
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 757-761
• 页数: 5页
• 分类号: R378
• 字数: 3010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.08.005

摘要

目的 构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用.方法 以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用镍亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化,Western blot检测其对人脑微血管内皮细胞紧密连接的调控.结果 构建的SSU05_1000重组表达质粒能够在大肠杆菌中高效表达,纯化的SSU05_1000蛋白纯度达90％以上,Western blot结果显示其与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)相互作用后,可以下调细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达.结论 SSU05_1000蛋白能够破坏人脑微血管内皮细胞的紧密连接结构,提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB,bloodbrain barrier)过程中起重要作用.