四环素诱导调控的腺病毒载体系统的构建及其应用

• 作者: 刘星 李方圆 韩树堂
• 来源期刊: 兰州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 四环素诱导调控 腺病毒载体 RNA干扰 强力霉素
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 4-9
• 页数: 6页
• 分类号: R394.6
• 字数: 3026字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建四环素诱导调控基因表达的腺病毒载体系统,评估该载体系统的高效性.方法 利用PCR、限制性内切酶酶切、连接等分子生物学手段构建四环素诱导调控体系中调节因子序列、应答元件序列的穿梭载体.通过同源重组的方法将载体上的四环素调控因子以及应答元件序列整合于腺病毒基因组.利用RT-PCR检测病毒载体上四环素调节因子(rtTA和tTA)在Hela细胞中的转录水平;荧光素酶活性测定分析腺病毒载体系统的效率.在不同浓度强力霉素的诱导下,检测荧光素酶报告基因活性变化,分析可诱导调控腺病毒系统的有效性和敏感性.结果 调控性腺病毒Ad-rtTATet-on与Ad-tTATet-off分别感染Hela细胞,逆转录PCR检测鉴定腺病毒载体Ad-rtTATet-on与Ad-tTATet-off的表达克隆用于调控应答性腺病毒Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC.在强力霉素的诱导下调控性腺病毒Ad-rtTATet-on与Ad-tTATet-off能够开启或关闭应答性腺病毒Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC的表达,从而达到调控荧光素酶的表达或RNA干扰荧光素酶基因的目的.结论 构建可诱导调控的腺病毒载体系统,该系统能够在强力霉素的调控下开/关目的基因、特异性干扰目的基因shRNA片段的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩树堂	江苏省中医院消化病诊疗暨内镜中心	48	160	6.0	9.0
2	李方圆	江苏省中医院消化病诊疗暨内镜中心	3	4	1.0	2.0
3	刘星		2	1	1.0	1.0