人转铁蛋白受体基因载体的构建与鉴定及在Hela细胞中的表达

• 作者: 周顺科 张斌 杨卉 秦燕 肖煜东
• 来源期刊: 中华消化病与影像杂志（电子版）
• 关键词: HeLa细胞 受体,转铁蛋白 质粒 逆转录聚合酶链反应 分子影像学
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 28-33
• 页数: 6页
• 字数: 5922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-2015.2013.02.008

摘要

目的 运用人转铁蛋白受体(hTfR)作为MR报告基因,制作包含hTfR蛋白编码区的表达质粒,并对其进行检测鉴定,为下一步体外、体内MR分子影像研究打下基础.方法 通过脂质体介导的基因转染构建过量表达hTfR的Hela细胞系,以pCDNA3.1 (+)-hTfR为实验组,转染空白质粒pCDNA3.1 (+)为对照组,运用PCR及Westen-Blot的方法在基因水平和蛋白水平检测hTfR在转染前后的表达水平,鉴定转染效果.结果 以pOTB7-TFRC质粒为模板,运用RT-PCR的方法进行hTfR基因编码区的扩展,成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR高表达质粒,测序鉴定正确;通过脂质体转染Hela细胞,瞬时转染效率约70%;RT-PCR显示转染pCDNA3.1(+)-hTfR质粒组较对照组生成的hTfR mRNA明显增高(1.179±0.047 vs.0.260,t=16.8,P＞0.05);Western-Bolt显示转染组较对照组编码的TfR蛋白明显增高(0.648±0.025 vs.0.333,t=10.8,P＜0.05).结论 成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR表达质粒;质粒转染Hela细胞后表达的hTfR mRNA及hTfR蛋白均明显增高;为下一步分子影像学的实验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周顺科	中南大学湘雅二医院放射科	85	460	12.0	16.0
2	张斌	中南大学湘雅二医院放射科	72	813	17.0	24.0
3	杨卉	中南大学湘雅二医院放射科	11	134	5.0	11.0
4	肖煜东	中南大学湘雅二医院放射科	6	12	2.0	3.0
5	秦燕	中南大学湘雅二医院放射科	4	19	2.0	4.0