稳定表达犬转铁蛋白受体CHO细胞系的建立和鉴定

• 作者: 孙玉宁 张薇 朱燕妮 白鲁根 闫琰 黄菱
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 转铁蛋白受体 CHO细胞 真核表达载体 稳定表达
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 57-60,80
• 语种: 中文

摘要

目的 构建犬转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)的真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢CHO细胞,建立稳定表达犬TfR的CHO-TfR细胞系.方法 从犬腺细胞系(WRD)提取总RNA,逆转录合成cDNA,采用PCR方法扩增TfR基因,将其克隆至真核表达载体pCDNA3,酶切和测序鉴定;利用脂质体法转染CHO细胞,通过RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测TfR的表达.结果 构建的pCDNA3-TfR重组质粒经过酶切和测序鉴定,TfR基因序列成功插入到pCDNA3载体,且无突变.转染CHO细胞后,RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测TfR表达阳性,成功建立了稳定表达犬TfR的CHO-TfR细胞系.结论 成功构建了真核表达载体pCDNA3-TfR,并获得了稳定表达TfR的CHO-TfR细胞系.