硅胶干燥罗布麻叶片DNA提取及RAPD反应体系建立

• 作者: 任曼丽 冉启洋 吕光辉 吕杰 张雪妮 苏前
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 罗布麻 RAPD体系 DNA提取
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 524-529
• 页数: 6页
• 分类号: S567.23|S188
• 字数: 3250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2013.03.020

摘要

[目的]得到适用于罗布麻RAPD的最优体系.[方法]以伊犁地区新源县罗布麻硅胶干燥叶片为材料,采用TIANGEN试剂盒提取罗布麻基因组DNA,得到满足RAPD(Random amplified polymorphic DNA)分析的罗布麻基因组DNA.[结果]通过单因素优化实验,得到罗布麻RAPD分析的最佳反应体系为:Mg2+ (2.0mmol/L)、dNTPs(0.5 mmol./L)、primer(0.4 mmol/L)、DNA(1μL)、Tap酶取1μL、10×buffer取1μL,总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2min),最后在72℃延伸7 min.[结论]提取的罗布麻总DNA均有较高的质量,适合RAPD分析；Tiangen植物基因组DNA提取试剂盒对罗布麻基因组DNA有着良好的提取效果；对罗布麻RAPD-PCR中Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶和引物浓度进行优化,较为理想的各因子用量和扩增程序为:Mg2+(2.0 mmol/L)、dNTPs(0.5mmol/L)、primer(0.4 mmol/L)、Tap酶(0.5 U/μL)、DNA(40 ng),总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性5 min,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2 min),最后在72℃延伸7min.