腺病毒介导的Akt/mTOR基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡

• 作者: 叶志斌 吴毓敏 夏世金 张晓丽 陆文俊
• 来源期刊: 老年医学与保健
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 Akt/mTOR 肾细胞癌 肾癌786-O细胞 PCNA
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 149-152,164
• 页数: 5页
• 分类号: R737.11
• 字数: 3183字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8296.2013-07

摘要

目的 应用腺病毒技术下调Akt/mTOR表达水平,检测Akt/mTOR基因沉默对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 收集人肾癌及癌旁样品,Real time PCR检测两组样品中Akt和mTOR的mRNA水平.利用病毒包装细胞293A获得靶向Akt/mTOR基因的重组腺病毒,感染人肾癌786-O细胞株.实验分2组:加入靶向Akt/mTOR基因的腺病毒感染的肾癌细胞组(rAd5-Am组),未处理的腺病毒感染的肾癌细胞组(NC组).应用Real time PCR及Western blot检测干扰前后Akt和mTOR mRNA及蛋白表达水平的变化.用细胞增殖及凋亡试剂盒检测Akt和mTOR沉默后,肾癌786-O细胞增殖、凋亡及PCNA表达水平的改变.结果 与癌旁组织相比,Akt和mTOR的mRNA水平在肾癌组织中分别上调了2.613和3.254倍.成功获得knock down Akt/mTOR的rAd5-Am腺病毒及对照腺病毒,感染肾癌786-O细胞.Real time PCR显示rAd5-Am组与NC组相比Akt/mTOR的mRNA水平分别下调65.3％和77.1％,Western blot结果显示rAd5-Am组与NC组相比Akt/mTOR的蛋白表达水平分别下调78.4％和89.2％.rAd5-Am能显著降低786-O细胞中Akt/mTOR基因的表达.细胞增殖与凋亡实验表明,Akt/mTOR基因沉默后能显著抑制肾癌细胞786-O的增殖,并促进其凋亡(rAd5-Am组细胞凋亡率是NC组的2.57倍).进一步的实验结果表明,Akt/mTOR下调后能降低PCNA的蛋白量,从而抑制肾癌细胞的增殖.rAd5-Am感染的肾癌786-O细胞的增殖和PCNA蛋白量受到抑制,而凋亡率增加.结论 构建出能稳定干扰Akt/mTOR基因表达的肾癌786-O细胞株.Akt/mTOR腺病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性Akt/mTOR基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖,下调PCNA的表达,并促进细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张晓丽	复旦大学附属华东医院肾内科	30	85	5.0	7.0
2	叶志斌	复旦大学附属华东医院肾内科	69	224	9.0	12.0
3	夏世金		9	57	4.0	7.0
4	吴毓敏	复旦大学附属华东医院肾内科	7	10	2.0	2.0
5	陆文俊	复旦大学附属华东医院肾内科	2	2	1.0	1.0