含猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因片段的重组腺病毒构建与鉴定

• 作者: 余辉 周小鸥 周英棠 汤自豪 汪涛
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌2型 溶菌酶释放蛋白(MRP) 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 350-353
• 分类号: R392-33|S858.28
• 语种: 中文

摘要

目的 构建猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)基因片段的重组腺病毒并对其进行鉴定.方法 根据MRP的基因序列,设计合成1对引物,以SS2型基因组为模板,扩增MRP基因片段(467-1351)序列.将PCR产物通过pMD18-T载体克隆后,再连接至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MRP,再经PmeI酶切,然后转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞中,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAdeno-CMV-MRP.PacI酶切线性化该重组腺病毒质粒,再转染AD-293细胞进行病毒包装,最后对细胞包装的病毒液进行PCR和Western blot法鉴定.结果 重组腺病毒质粒pAdeno-CMV-MRP转染AD-293细胞8d后出现明显的细胞病变,在培养细胞的上清病毒液中也检测到了MRP基因片段及其表达的蛋白.结论 成功构建了SS2型MRP基因片段的重组腺病毒(rAdeno-MRP).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余辉	九江学院基础医学院病原生物学教研室	15	31	3.0	4.0
2	汤自豪	九江学院基础医学院病原生物学教研室	10	60	5.0	7.0
3	周英棠	九江学院基础医学院江西省系统生物学临床应用重点实验室	7	4	2.0	2.0
4	周小鸥	九江学院基础医学院病原生物学教研室	14	28	3.0	4.0
5	汪涛	九江学院基础医学院病原生物学教研室	9	29	4.0	5.0